聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性

      聚丙烯酰胺凝膠是一種合成凝膠，由亞甲基雙丙烯酰胺以丙烯酰胺為單位交聯(lián)，干燥、粉碎或加工成顆粒，通過(guò)控制交聯(lián)劑的用量可以制成各種類型的凝膠。交聯(lián)劑越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝膠的商業(yè)產(chǎn)品是Bio-Gelp，是日本tosoh的TSKGEL的pw系列，適用于蛋白質(zhì)和多糖的純化。即丙烯酰胺和少量交聯(lián)劑亞甲基雙丙烯酰胺在催化劑TEMED和氧化劑過(guò)LS銨作用下聚合形成凝膠。今天我們來(lái)看看PAM凝膠的兩種電泳形態(tài)。
變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)是基于寡核苷酸的大小，所以全長(zhǎng)產(chǎn)物可以從不完整的短分子中分離出來(lái)。通常，在電泳過(guò)程中，每個(gè)泳道中加入至少1毫克的合成寡核苷酸。電泳后，寡核苷酸帶位于紫外燈下，從凝膠上切下正確長(zhǎng)度的寡核苷酸。原理：蛋白質(zhì)或多肽與SDS結(jié)合，經(jīng)過(guò)熱變性和二硫鍵還原，形成負(fù)電荷相對(duì)一致的未折疊衍生物，其遷移速度主要由分子量決定。
非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)，或活性電泳，用于對(duì)活性蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，無(wú)需添加變性劑如SDS、乙醇等，常用于酶的鑒定、同工酶分析和純化。無(wú)SDS的天然pam凝膠電泳可以在電泳過(guò)程中保持生物大分子的天然形狀和電荷。它們的分離是基于電泳遷移率和凝膠分子篩作用的差異，因此可以獲得更高的分辨率，特別是電泳分離后，蛋白質(zhì)、酶等生物大分子的生物活性仍然可以保持，這對(duì)生物大分子的鑒定具有重要意義。該方法是將兩個(gè)相同的樣品在凝膠上電泳，電泳后將凝膠切成兩半，一半用于活性染色以鑒定特定的生物大分子，另一半用于染色所有樣品以分析樣品中各種生物大分子的類型和含量。